穩定細胞株是指具有長(cháng)時(shí)間傳代穩定轉基因表達的細胞系，其原理主要包括兩個(gè)方面：轉染外源DNA和篩選穩定轉染細胞。
 

　　穩定細胞株的建立需要將外源DNA轉染到目標細胞中。目前常用的轉染方法有瞬時(shí)轉染和穩定轉染兩種。瞬時(shí)轉染主要通過(guò)電轉、化學(xué)轉染或病毒載體介導的轉染方式將外源DNA引入細胞中，但由于外源DNA在細胞內并不穩定，很快會(huì )被降解掉，因此瞬時(shí)轉染無(wú)法實(shí)現長(cháng)時(shí)間穩定的轉基因表達。相比之下，穩定轉染則通過(guò)將外源DNA整合到細胞染色體中(如利用病毒介導的轉染)，或者利用ssiRNA介導的轉染來(lái)實(shí)現穩定轉基因表達。這樣轉染的細胞在傳代過(guò)程中能夠保持外源DNA的整合狀態(tài)，從而實(shí)現長(cháng)時(shí)間穩定的轉基因表達。
 

　　其次，篩選穩定轉染細胞是穩定細胞株建立的另一個(gè)重要環(huán)節。穩定轉染細胞一般會(huì )攜帶有外源基因和篩選標記基因(如抗生素抗性基因)的表達載體，通過(guò)添加相應的篩選物質(zhì)(如抗生素)來(lái)選擇和篩選細胞中整合了外源DNA的細胞。只有在經(jīng)過(guò)篩選后的細胞中，外源DNA與篩選標記基因才能穩定遺傳給下一代細胞，并產(chǎn)生穩定表達的轉基因。此外，還可以利用構建熒光蛋白標記基因(如綠色熒光蛋白)來(lái)實(shí)現綠色熒光蛋白的特異性表達，從而篩選出綠色熒光蛋白陽(yáng)性的細胞。
 

　　穩定細胞株的使用方法：
 

　　1.通過(guò)轉染細胞株，通常是采用質(zhì)粒介導的轉染方法，將目標基因或蛋白的表達載體導入細胞中。同時(shí)加入適當的篩選或選擇抗生素，使得只有轉染成功的細胞能夠生存下來(lái)。經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養和篩選，從中篩選出穩定表達目標基因或蛋白的細胞株。
 

　　2.主要應用之一是用于穩定表達外源基因的研究。研究人員可以構建和表達自己感興趣的基因，然后將其導入目標細胞株中，以研究該基因的功能、調控機制等。利用可以實(shí)現長(cháng)時(shí)間連續表達目標基因，確保實(shí)驗結果的可靠性。
 

　　3.還可用于蛋白的表達和功能研究。研究人員可以將感興趣的蛋白導入中，使其在細胞內穩定表達。借助可以定量表達特定蛋白，用于酶活測定、蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用研究、信號轉導途徑、細胞分裂、細胞凋亡等功能研究。
 

　　4.也可用于藥物篩選和毒性測試。研究人員可以利用，如癌細胞株，檢測不同藥物或化合物的生物活性、毒性等。通過(guò)與對照組進(jìn)行比較，可以評估藥物的療效或毒性，并且可以為藥物開(kāi)發(fā)和篩選提供參考。